Unser Service ermöglicht die Produktion von affinitätsgereinigten polyklonalen Antikörpern, die monospezifisch den phosphorylierten Zustand ihres Zielproteins erkennen.

Das Verfahren beinhaltet die Synthese von zwei gleichen Peptidepitopen, die sich nur durch eine Phosphorylierungsstelle innerhalb der Peptidsequenz unterscheiden.  

Die Tiere werden mit dem phosphorylierten Peptid immunisiert. Aus dem dabei erhaltene Antiserum wird durch zweimalige Affinitätssäulen-Chromatographie die phosphospezifische Antiserum-Fraktion isoliert.

Ausführliche ELISA Untersuchungen werden sowohl an der Fraktion der „phosphospezifischen IgG Antikörper“, als auch an der Fraktion, die für den „nicht-phosphorylierten Zustand des Antigens“ spezifisch ist, durchgeführt.

Für die phosphospezifische Antiserum-Fraktion garantieren wir Ihnen einen Titer von > 1: 20.000.


Sie erhalten die Antikörper aus beiden Fraktionen, sowie eine zusammenfassenden Dokumentation der durchführten Analysen (ELISA, HPLC, MS).

Der angebotene Service  besteht aus den folgenden Arbeitsabschnitten:

  1. Sie wählen auf ihrem Protein das Peptidepitop  aus. Idealerweise ist das Epitop  10 AS bis 15 AS lang und weist am N- oder C-Terminus ein Cystein auf. Längere Epitopabschnitte sind  ebenfalls möglich. *)
  2. Wir synthetisieren für Sie dieses Peptidepitop und das phosphorylierte  Analogon.
  3. Wir konjugieren das phosphorylierte Peptid an KLH und immunisieren zwei Kaninchen damit. Wir führen hierzu 4 Immunisierungsschritte innerhalb von 70 Tagen durch.
  4. Die Seren der Tiere werden über zwei Affinitätschromatographiesäulen hintereinander gereinigt. Das Säulenfüllmaterial der ersten Säule ist mit dem phosphorylierten Peptid und das Säulenfüllmaterial der zweiten Säule mit dem unphosphorylierten Peptid gekoppelt.  
  5. Die beiden Eluate werden separat gesammelt und mittels ELISA getestet.
  6. Optional bieten wir Ihnen außerdem die Markierung der affinitätsgereinigten IgG  mit z.B. Biotin, HRP oder Rhodamin an.

*) Gerne unterstützen wir Sie auch bei diesem Arbeitsabschnitt.

Produktion phosphospezifischer Antikörper

  

                 

Peptide, Gene & polyklonale Antikörper für Ihre Forschung

 Affinitätsgereinigte phosphospezifische Antikörper.

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