Pro- und Eukaryotische Proteinexpression.


Das Bakterium E. coli ist ein einfaches und gut verstandenes System, in welchem Proteine rasch in größeren Mengen kostengünstig überexprimiert werden können. Die so hergestellten Proteine sollten allerdings relativ kurz sein, ansonsten liegen sie als schwerlösliche inclusion bodies vor. Das optimale System zur Herstellung humanidenter Proteine wäre die Expression in Säugerzellen, diese jedoch stellen hohe Anforderungen an die Kulturbedingungen und sind daher sehr kostenintensiv.

Eine gute Alternative dazu bieten unsere Baculovirus-Insektenzellen-Systeme. Diese Systeme ermöglichen die Herstellung großer, glykosylierter und auch multimerer Proteine mit Disulfidbrücken. Die korrekte Faltung der Proteine, durch Ausbildung von Disulfidbrücken an den richtigen Positionen, wird durch die reduzierenden Bedingungen im Kulturmedium und die besonderen Stoffwechselwege in den Insektenzellen (Sf9, Sf21) möglich.


Auch in punkto Arbeitssicherheit sind Baculovirus-Insektenzellen-Systeme von Vorteil, da diese Viren ein sehr enges Wirtsspektrum besitzen und sich im Menschen nicht vermehren können.

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Sie kennen die Gensequenz ihres Proteins ?

Gerne sind wir bereit diese Gensequenz für Sie zu synthetisieren und in geeignete Vektoren zu klonieren. Durch Codon-Optimierung können wir ihre Sequenz genau auf Ihr Expressionssysteme abstimmen. Wir exprimieren Proteine in prokaryotischen E. coli oder im eukaryotischen Baculovirus-Insektenzellen-Expressionssystem, Sf9.

Sie haben ein Protein aber keine weiteren Geninformationen dazu ?

Durch Proteinsequenzierung (Edman-Abbau, MS) können wir Ihnen Hinweise auf die Identität Ihres Proteins liefern. Bitte fragen Sie uns nach Details hierzu. E-mail: info@genosphere-biotech.de .

Abb. 2. Die SDS-PAGE zeigt verschiedene Reinigungsstufen eines C-terminal mit einem (His)6 Tag markierten rekombinanten Proteins.

Service Pack G1000-Ecoli01:

Subcloning of target gene in T7 promoter-based expression vectors ; transform construct into 3 different E coli strains ; Expression pilot study: cytoplasm or inclusion bodies ; Scale up expression and purification:  1-2 L fermentation; ultrasonication; Affinity purification (Ni2+ or GST column); Protein concentration determination and SDS-PAGE analysis.

Delivery: 5 mg purified protein, purity >90%, with His or GST tag


Pilotreaktor zur Kultivierung von E. coli

Abb. 1: In einem Pilotreaktor zur Kultivierung von E. coli werden milligramm-Mengen des (His)6 Tag markierten Proteins  produziert. Ein anschliessendes up-scaling der Produktion ist möglich.

Gerne erstellen wir Ihnen für ihr Projekt ein Angebot, bitte nutzen Sie dazu unser Online-Formular.

Bitte geben Sie bei  ihrer schriftlichen Bestellung, die im Angebot genannte Angebotsnummer an. Sie können uns die unterschriebene Bestellung per Fax oder E-mail (PDF-Anhang) zusenden.


Proteinexpressions Service

  

                 

Peptide, Gensynthesen & Antikörper für Ihre Forschung

 Inquiries / Informations : info@genosphere-biotech.de

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